Tο Resident Evil 5 μας ταξιδεύει στην περίπου 10 χρόνια μετά από τα γεγονότα του αρχικού Resident Evil. Η ιστορία εκτυλίσσεται γύρω από τη ζωή του Chris Redfield, στο 10 ετές διάστημα μεταξύ του Resident Evil 3 και του Resident Evil 5. O Chris πλεόν είναι ένα μέλος μιας οργάνωσης γνωστής ως Bio-terrorism Security Assesment Alliance (BSSA) και έχει σταλεί για να εξερευνήσει ένα συμβάν που συνέβει σε μια ερημωμένη τοποθεσία, η οποία αποτελεί και το σκηνικό περιβάλλον όλης της περιπέτειας. Για την τοποθεσία που συμβαίνουν τα γεγονότα του Resident Evil 5, επιλέχθηκε η ήπειρος της Αφρικής, διότι σύμφωνα με το storyline του παιχνιδιού θεωρείται το μέρος από το οποίο ξεκίνησε ο "κόσμος" και θα αφορά τις "τις καταβολές του ιού". Τα βασικά στοιχεία του παιχνιδιού εκτυλίσσονται γύρω από τη δράση της ομάδας S.T.A.R.S στην φανταστική χώρα της Αφρικής που ονομάζεται, Kijuju.

O Chris Redfield συνοδεύεται από μια θυληκή παρουσία, ονόματι Sheva Alomar, η οποία είναι μια πράκτορας του τμήματος της B.S.A.A στη Δυτική Αφρική που θα βοηθήσει τον Redfield να εξιχνοιάσει το συμβάν.

Στις ορδές εχθρών που θα συναντήσετε εξερευνόντας τον κόσμο του Resident Evil 5, θα συναντήσετε την νέμεσις του Chris Redfield, τον Albert Wesker και μια γυναίκα ονόματι Excella Gionne, η οποία είναι συγγενής του ιδρυτή της Tricell Pharmaceutical Company και διοικεί το αφρικανικό τμήμα της εταιρείας. Τέλος θα εμφανιστεί για πρώτη φορά ο ιδρυτής της Umbrella Corp., Ozwell E. Spencer ο οποίος είναι χαρακτήρας κλειδί για όλη τη σειρά των Resident Evil και με την εμφάνιση του λέγεται ότι εξηγούνται οι καταβολές του T-Virus.